Prevalencia de subtipos de cáncer de mama y su asociación con factores reproductivos / Prevalence of breast cancer subtypes and their association with reproductive factors

Introducción: Los factores reproductivos se asocian con cáncer de mama. Actualmente se estudia el comportamiento según subtipos moleculares. Objetivo: Establecer la prevalencia de estos subtipos y su asociación con factores reproductivos en mujeres atendidas en centros del nororiente colombiano. Método: Estudio observacional de corte transversal, en mujeres con cáncer de mama subtipos luminales y HER2 durante 2012-2021. Se indagaron variables sociodemográficas, factores reproductivos y estadio tumoral. Resultados: En total, 347 pacientes cumplieron criterios de elegibilidad, correspondiendo a luminal A el 49,8% (intervalo de confianza del 95% [IC95%]: 44,5-55,1), a luminal B el 29,1% (IC95%: 24,3-33,9) y a HER2 el 15,5% (IC95%: 11,7-19,4). Las mujeres con tumores de mama luminal B tenían más riesgo de tener estadios localmente avanzados (odds ratio [OR]: 1,83; IC95%: 1,11-3,01; p = 0,02). Agrupando los subtipos luminales frente a HER2 se encontró que el 40,72% de las pacientes con subtipos luminales no habían lactado, frente al 69,71% con HER2 (diferencia estadísticamente significativa a favor de luminal A; OR: 1,91; IC95%: 1,02-3,53; p = 0,041). Conclusiones: La prevalencia de tumores luminales es del 84,5%. Existe asociación diferencial entre el antecedente de lactancia materna y la aparición de subtipos luminales, es decir, las mujeres que no lactaron se corresponden con mayor frecuencia con HER2. No se estableció asociación con otros factores estudiados.

Introduction: Stimulus-estrogenic factors are associated with breast cancer. Currently, the behavior according to molecular subtypes is being studied. Objective: To establish the prevalence of these subtypes and their association with reproductive factors in women attended in centers in northeastern Colombia. Method: Observational cross-sectional study in women with breast cancer subtypes luminal and HER2 during 2012 -2021. Sociodemographic variables, stimulus-estrogenic factors and tumor stage were investigated. Results: In total, 347 patients met eligibility criteria, corresponding to luminal A 49.8% (95% confidence interval [95%CI]: 44.5-55.1), luminal B 29.1% (95%CI: 24.3-33.9) and HER2 15.5% (95%CI: 11.7-19.4). Women with luminal B breast tumors were at higher risk of having locally advanced stages (odds ratio [OR]: 1.83; 95%CI: 1.11-3.01; p = 0.02). Grouping the luminal subtypes versus HER2 showed that 40.72% of patients with luminal subtypes had not lactated, compared to 69.71% HER2 (statistically significant difference in favor of luminal A; OR: 1.91; 95%CI: 1.02-3.53; p = 0.041). Conclusions: The prevalence of luminal tumors is 84.5%. There is a differential association between the history of breastfeeding and the appearance of luminal subtypes, i.e., women who did not breastfeed are more likely to have HER2. No association was established with other factors studied.

Muerte súbita y secuenciación de siguiente generación. Revisión bibliográfica / Sudden death and next generation sequencing. A review

Introducción: la muerte súbita se trata de un evento fatal e imprevisible. Realizada la autopsia y estudios complementarios, en ausencia de otros hallazgos que expliquen la causa de muerte, se clasifica como muerte súbita inexplicada. Siendo recomendable en estos casos realizar análisis genéticos, especialmente con metodologías de secuenciación de siguiente generación, las que permiten explicar un porcentaje importante de estos casos. Objetivo: analizar las publicaciones más relevantes sobre secuenciación de siguiente generación, aplicada a la autopsia molecular, para determinar aquellas muertes súbitas inexplicables relacionadas a cardiomiopatías y canalopatías. Metodología: se realizó la búsqueda en PubMed del Instituto Nacional de Salud usando palabras clave en inglés y español: NGS, muerte súbita, autopsia molecular y sus combinaciones. Además, se realizaron búsquedas en OMIN y ClinVar relacionada a las diferentes afecciones cardiacas relacionadas a muerte súbita. Los criterios de inclusión: artículos completos en español e inglés de libre acceso, con antigüedad máxima de diez años, realizados en cualquier área geográfica y que trataran sobre la temática. Resultados: para secuenciación de siguiente generación, muerte súbita se encontraron más de 22000 y 65000 publicaciones, respectivamente. En cambio, al combinar las palabras clave se recuperaron 74 trabajos, según los criterios de inclusión y objetivo del trabajo se revisaron 67 artículos. La aplicación de las plataformas de secuenciación en la investigación de casos de muerte súbita tomo auge en el 2014 y en poco tiempo, demostraron su versatilidad para el análisis de una gran cantidad de genes simultáneamente, de forma rápida y a bajo costo. Conclusiones: las patologías asociadas a muerte súbita son múltiples, complejas y pueden generar fenotipos variables que dificultan el análisis genético de las mismas. Las plataformas de secuenciación de siguiente generación son sumamente útiles en los casos de muerte súbita inexplicada, además permiten la identificación de variantes genéticas en familiares para la implementación de medidas preventivas...(AU)

Perfil imuno-histoquímico dos casos de carcinomas mamários da microrregião de catanduva-sp / Immunohistochemical profile of breast carcinoma cases from the microregion of catanduva-sp / Perfil inmunohistoquímico de los casos de carcinomas de mama en la microrregión de catanduva-sp

Introdução: O câncer de mama compreende a principal neoplasia maligna que acomete as mulheres brasileiras, com destaque nos índices de mortalidade. O diagnóstico precoce é preconizado através da mamografia, a qual, quando alterada, sugere realizar biópsia para estudo histopatológico e, caso confirmado um carcinoma mamário, acrescenta-se o estudo imuno-histoquímico para determinação de fatores prognósticos e preditivos para o tumor. Objetivos: Levantar os resultados de análise imuno-histoquímica dos carcinomas mamários diagnosticados pelo Serviço de Patologia do Hospital Emílio Carlos (Catanduva-SP) e estabelecer os principais subtipos moleculares do câncer de mama encontrados nessa população. Material e Método: O estudo foi transversal e retrospectivo, a partir dos relatórios de imunohistoquímica dos carcinomas. Foram relatados idade, sexo, subtipo histológico do tumor e positividade imunohistoquímica para receptor de estrogênio, receptor de progesterona, fator de crescimento epidérmico humano 2, índice de proliferação celular e E-caderina. Os casos foram classificados conforme os critérios estabelecidos pelo Consenso de St. Gallen e os dados apresentados por meio de gráficos e tabelas. Resultados: A amostra foi constituída por n=210 casos de carcinomas mamários, com idade média de 58 anos e predominantemente do sexo feminino. O tipo histológico predominante foi o carcinoma mamário invasivo do tipo não especial. A expressão de receptor de estrogênio ocorreu em 92,86%, progesterona 80,48%, HER2 32,38% e Ki67 alto em 70%. O principal subtipo molecular foi o luminal B. Conclusão: Os casos de carcinomas mamários da microrregião de Catanduva apresentam diferenças quando comparados com estudos nacionais, porém similares a outros de caráter regional

Introduction: Breast cancer is the main malignant neoplasm that affects Brazilian women, especially in mortality rates. Early diagnosis is recommended through mammography, which, when altered, suggests biopsy for histopathological study and, if a breast carcinoma is confirmed, the immunohistochemical study is added for determination of prognostic and predictive factors for the tumor. Objectives: To survey the results of immunohistochemical analysis of breast carcinomas diagnosed by the Pathology Service of Hospital Emílio Carlos (Catanduva-SP) and to establish the main molecular subtypes of breast cancer found in this population. Material and Method: The study was cross-sectional and retrospective, from the reports of immunohistochemistry of carcinomas (CEP/UNIFIPA number 4737142). Age, sex, histological subtype of the tumor and immunohistochemical positivity for estrogen receptor, progesterone receptor, human epidermal growth factor 2, cell proliferation index and E-cadherin were reported. The cases were classified according to the criteria established by the St. Gallen Consensus and the data presented by means of graphs and tables. Results: The sample consisted of n=210 cases of breast carcinomas, with a mean age of 58 years and predominantly female. The predominant histological type was invasive breast carcinoma of the non-special type. Estrogen receptor expression occurred in 92.86%, progesterone 80.48%, HER2 32.38% and high Ki67 in 70%. The main molecular subtype was luminal B. Conclusion: The cases of breast carcinomas in the microregion of Catanduva present differences when compared to national studies, but similar to other regional studies

Introduction: Breast cancer comprises the main malignant neoplasm that affects Brazilian women, especially in mortality rates. Early diagnosis is recommended through mammography, which, when altered, suggests biopsy for histopathological study and, if confirmed a breast carcinoma, the immuno-study is addedto determine prognostic and predictive factors for the tumor. Objectives: To collect the results of immunohistochemical analysis of breast carcinomas diagnosed by the Pathology Service of the Emílio Carlos Hospital (Catanduva-SP) and to establish the main molecular subtypes of breast cancer found in this population. Methods: The study was cross-sectional and retrospective, from the reports of immunohistochemistry of carcinomas. Age, sex, tumor histological subtype and immunohistochemical positivity for estrogen receptor, progesterone receptor, human epidermal growth factor 2, cell proliferation index and E-cadherin were reported. The cases were classified according to the criteria established by the St. Gallen Consensus and the data presented through graphs and tables. Results: The sample consisted of n = 210 cases of breast carcinomas, with a mean age of 58 years and predominantly female. The predominant histological type was nonspecial invasive breast carcinoma. The expression of estrogen receptor occurred in 92.86%, progesterone 80.48%, HER2 32.38% and Ki67 high in 70%. The main molecular subtype was luminal B. Conclusion: The cases of breast carcinomas in the Catanduva microregion show differences when compared to national studies, but similar to others of regional character

Bases moleculares de los tumores odontogénicos benignos: revisión de la literatura en el contexto de la última clasificación de la Organización Mundial de la Salud

Resumen Los tumores odontogénicos (TOs) son un grupo heterogéneo de lesiones que incluyen hamartomas hasta neoplasias benignas o malignas. El presente estudio tuvo como objetivo revisar la literatura sobre los aspectos moleculares y genéticos de algunos TOs benignos. A partir de los estudios revisados, se apoya la idea de que las causas genéticas pueden tener un papel importante en la etiología y en la patogénesis de algunos TOs. Sin embargo, las investigaciones sobre el tema aún no permiten concluir de manera sólida los mecanismos definitivos involucrados en el desarrollo y en la progresión de los TOs. Se sugiere el desarrollo de más estudios moleculares y genéticos que evalúen muestras significativas de TOs para establecer su etiopatogenia, facilitar su proceso diagnóstico y enriquecer su abordaje terapéutico.

Resumo Os tumores odontogênicos (TOs) são um grupo heterogêneo de lesões que variam desde hamartomas até neoplasias benignas ou malignas. O presente estudo teve como objetivo revisar a literatura sobre os aspectos moleculares e genéticos de alguns TOs benignos. A partir dos estudos revisados, apoia-se que as causas genéticas podem desempenhar um papel importante na etiologia e patogênese de alguns TOs. No entanto, as pesquisas sobre o assunto ainda não permitem uma conclusão sólida sobre os mecanismos definitivos envolvidos no desenvolvimento e progressão dos TOs. Sugere-se o desenvolvimento de mais estudos moleculares e genéticos para avaliar amostras significativas de TOs para estabelecer sua etiopatogenia, facilitar seu processo diagnóstico e enriquecer sua abordagem terapêutica.

Abstract Odontogenic tumors (OTs) are a heterogeneous group of lesions that range from hamartomas to benign or malignant neoplasms. The present study aimed to review the literature regarding the molecular and genetic aspects from some benign OTs. Based on the review of the included studies, it is supported that genetic background may play an important role in the etiology and pathogenesis of OTs. However, the body of evidence on the subject still does not allow to conclude the definitive mechanisms involved in the development and progression of OTs. It is suggested the development of further molecular and genetic studies evaluating significant samples of OTs to establish its etiopathogenesis, facilitate its diagnostic process and enrich the therapeutic approaches.

Detección del polimorfismo p.K952L en pacientes cubanos con la enfermedad de Wilson

RESUMEN Fundamento La enfermedad de Wilson es una entidad rara con patrón de herencia autosómico recesivo, a causa de las mutaciones en el gen ATP7B, lo cual provoca la acumulación de cobre en tejidos y órganos. En la literatura se informan más de 800 polimorfismos. Objetivo identificar el polimorfismo p.K952L en los pacientes cubanos con diagnóstico clínico presuntivo de enfermedad de Wilson. Métodos se realizó un estudio descriptivo, en el Centro Nacional de Genética Médica y el Instituto Nacional de Gastroenterología, que incluyó 35 pacientes con diagnóstico clínico de la enfermedad de Wilson. La extracción del ADN fue por la técnica de precipitación salina; y la amplificación del fragmento de interés, mediante la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa. Además, se empleó la técnica de Polimorfismo Conformacional de Simple Cadena para la determinación de los cambios conformacionales y la presencia del polimorfismo p.K952L. Resultados en el exón 12 se identificaron los cambios conformacionales denominados b y c, que correspondieron al polimorfismo p.K952L en estado heterocigótico y homocigótico, respectivamente. La frecuencia alélica del polimorfismo p.K952L fue de 38,6 %. Las manifestaciones más frecuentes en los pacientes que presentaron este polimorfismo fueron las hepáticas. Conclusión Se identificó el polimorfismo p.K952L en 21 pacientes cubanos con diagnóstico clínico de enfermedad de Wilson, lo cual posibilita ampliar los estudios moleculares por métodos indirectos.

ABSTRACT Background Wilson's disease is a rare entity with an autosomal recessive inheritance pattern, due to mutations in the ATP7B gene, which causes the accumulation of copper in tissues and organs. More than 800 polymorphisms are reported in the literature. Objective to identify the p.K952L polymorphism in Cuban patients with a presumptive clinical diagnosis of Wilson's disease. Methods a descriptive study was carried out at the Medical Genetics National Center and the Gastroenterology National Institute, which included 35 patients with a Wilson's disease clinical diagnosis. DNA extraction was by saline precipitation technique; and the amplification of the fragment of interest, by means of the Polymerase Chain Reaction technique. In addition, the Simple Chain Conformational Polymorphism technique was used to determine the conformational changes and the presence of the p.K952L polymorphism. Results in exon 12 the conformational changes called b and c were identified, which corresponded to the polymorphism p.K952L in the heterozygous and homozygous state, respectively. The allelic frequency of the p.K952L polymorphism was 38.6%. The most frequent manifestations in patients with this polymorphism were liver. Conclusion The p.K952L polymorphism was identified in 21 Cuban patients with a clinical diagnosis of Wilson's disease, which makes it possible to extend molecular studies by indirect methods.

Patología y salud pública: Oportunidades para el avance / Pathology and public health: opportunities for progress

La patología y la salud pública son disciplinas que se complementan en múltiples formas, desde la información que aportan mutuamente a niveles individual y poblacional, hasta la elaboración de políticas públicas en salud y la gestión de la información en los biobancos, así como la articulación para respuesta en emergencias y brotes. En revisión no sistemática resaltamos que los dos campos de mayor colaboración con la salud pública son la patología forense (comprendiendo muertes violentas y no violentas) y la patología molecular, realizando aportes significativos a la planeación de los servicios de salud, la calidad de la información epidemiológica, la salud pública basada en la evidencia que permite una mejor toma de decisiones, y la gestión de la salud comunitaria y poblacional. A partir de la revisión realizada se identificaron como puntos de mejora el uso de los sistemas de información, la necesidad de un enfoque interdisciplinario más tangible, y la urgente transformación educativa que subyace a esta colaboración.

Pathology and public health are disciplines that complement each other in many ways, from the information they provide to each other at the individual and population levels, to the development of public health policies and the management of information in biobanks, as well as articulation in responding to emergencies and outbreaks. Our non-systematic review highlights that the two most relevant fields which collaborate with public health are forensic pathology (including violent and non-violent deaths) and molecular pathology, making significant contributions to health care planning, the quality of epidemiological information, evidence-based public health that enables better decision-making, and community and population health management. This review identified the use of information systems, the need for a more tangible interdisciplinary approach, and the urgent educational transformation that underlies this collaboration, as areas for improvement.

CRISP3 glycoprotein: a good biomarker for prostate cancer? / Glicoproteína CRISP3: um bom biomarcador para câncer de próstata?

ABSTRACT Introduction: Cysteine-rich secretory protein 3 (CRISP3) is expressed at low levels in normal human prostate but often overexpressed in prostate cancer (PCa). The relevance of this overexpression for the malignancy of PCa is still unclear. The prognostic value of the currently used prostate specific antigen (PSA) test can be misleading under certain circumstances, resulting in overtreatment of indolent tumors. New biomarkers are needed to reduce overtreatment and improve quality of life of men. Objective: Evaluate if CRISP3 expression could be a good biomarker for PCa. Methods: CRISP3 expression was determined by immunohistochemistry in tissue sections of prostate cancer from twenty-five patients subjected to radical prostatectomy. Gleason grading system was used as prognostic indicator and the staging of PCa was defined using the TNM system. Clinical parameters and PSA levels before and after surgery were determined. Results: CRISP3 expression was strong in 14 (56%), moderate in four (16%) and weak in seven (28%) specimens. There was no correlation between the intensity of CRISP3 expression and pre- and post-treatment PSA levels. Fifteen (60%) of PCa biopsies showed extension of the primary tumor pT2. Seven patients (28%) showed Gleason score higher than 7; thirteen (52%) equal to 7, and five (20%) lower than 7. There were no significant statistical differences between Gleason score and CRISP3 expression. Conclusion: CRISP3 is expressed in prostate cancer at different levels. Additional studies are required to better evaluate if CRISP3 could be used as a biomarker.

RESUMEN Introducción: La proteína rica en cisteína secretora 3 (CRISP3) se expresa en bajos niveles en la próstata humana normal, pero está mayormente expresada en el cáncer de próstata (CaP). Todavía, su relevancia en pacientes con CaP aún no está clara. La prueba de antígeno prostático específico (PSA) puede generar interpretaciones erróneas bajo ciertas circumstancias, acarreando sobretratamiento de tumores indolentes. Nuevos biomarcadores son fundamentales para evitar tratamientos innecesarios y mejorar la calidad de vida del paciente. Objetivo: Evaluar se la expresión de CRISP3 podría ser un buen biomarcador de CaP. Métodos: Se determinó la expresión de CRISP3 por inmunohistoquímica en cortes de tejido de CaP de 25 pacientes sometidos a prostatectomía radical. La clasificación Gleason fue utilizada como indicador pronóstico, y la estadificación fue determinada por el sistema TNM. Parámetros clínicos y niveles de PSA antes y después de la cirurgía fueron determinados. Resultados: La expresión de CRISP3 fue fuerte en 14 (56%) muestras; moderada en cuatro (16%) y débil en siete (28%). No hubo relación entre la expresión de CRISP3 y PSA pre y post-tratamiento. Quince (60%) biopsias de CaP tuvieron extensión del tumor primario pT2. Siete pacientes (28%) demostraron escala de Gleason mayor que 7; trece (52%), igual a 7; y cinco (20%), menor que 7. No hubo diferencias estadísticas significativas entre la escala de Gleason y la expresión de CRISP3. Conclusión: CRISP3 se expresa en CaP en diferentes niveles. Se necesitan estudios adicionales para evaluar se CRISP3 puede realmente ser usado como biomarcador.

RESUMO Introdução: A proteína CRISP3 é expressa em baixos níveis na próstata humana normal, mas superexpressa no câncer de próstata (CaP). Contudo, sua relevância em pacientes com CaP ainda não está clara. O teste de antígeno específico da próstata (PSA) pode proporcionar interpretações erradas em determinadas circunstâncias, resultando em excesso de tratamento para tumores indolentes. Novos biomarcadores são fundamentais para evitar tratamentos desnecessários e melhorar a qualidade de vida do paciente. Objetivo: Avaliar se a expressão de CRISP3 poderia ser um bom biomarcador para CaP. Métodos: A expressão de CRISP3 foi determinada por imuno-histoquímica em seções de tecido de CaP de 25 pacientes submetidos a prostatectomia radical. O sistema de classificação Gleason foi utilizado como indicador prognóstico, e o estadiamento foi determinado pelo sistema TNM. Parâmetros clínicos e níveis de PSA antes e pós-cirurgia foram determinados. Resultados: A expressão de CRISP3 foi forte em 14 (56%) amostras; moderada em quatro (16%) e fraca em sete (28%). Não houve correlação entre a expressão de CRISP3 e PSA pré e pós-tratamento. Quinze (60%) biópsias de CaP apresentaram extensão do tumor primário pT2. Sete pacientes (28%) mostraram escore de Gleason maior que 7; treze (52%), igual a 7; e cinco (20%), menor que 7. Não houve diferenças estatísticas significativas entre o escore de Gleason e a expressão de CRISP3. Conclusão: CRISP3 é expresso no CaP em diferentes níveis. Estudos adicionais são necessários para avaliar se CRISP3 realmente pode ser usado como biomarcador.

[Tumors of the thyroid gland. Proposal for the management and study of samples from patients with thyroid neoplasms]. / Tumores de la glándula tiroides. Propuesta para el manejo y estudio de las muestras de pacientes con neoplasias tiroideas.

The recent changes in the classification and staging of thyroid tumors have arisen from the need to provide an adequate response to the exponential increase of thyroid cancer, which, however, has not been accompanied by an increase in mortality. These changes pretend to reduce overdiagnoses of malignancy, unnecessary treatment, side effects as well as cost for the health system. To this end, this article reviews recommendations for the management of thyroid surgical pathology samples with emphasis on the new terminology of the WHO classification. The basic criteria for the diagnosis of malignancy in well-differentiated thyroid carcinomas are reviewed and the criteria for NIFTP (non-invasive follicular tumor with papillary-like nuclear features) diagnosis are updated. Recommendations for the elaboration of the pathological report are also included.

[Clinical challenges and implications of intratumor heterogeneity]. / Retos e implicaciones clínicas de la heterogeneidad intratumoral.

Tumors display a high, albeit variable, grade of intratumor heterogeneity, both from a clinical and a morphological viewpoint. Furthermore, recent methods of large-scale molecular analysis demonstrate to what extent tumors can also be heterogeneous from a molecular perspective. This is of paramount importance for patients as it has a great impact on the success of so-called precision therapies and explains the reason for a significant number of therapeutic failures in modern oncology. We present an up-to-date review of the latest findings in a group of tumors with a high social impact, commonly seen in the daily routine of the pathology laboratory.

Sindrome de Ehlers-Danlos cifoescoliótico-FKBP14 en una paciente adolescente: primer reporte de caso colombiano / FKBP14 kyphoscoliotic Ehlers-Danlos Syndrome in adolescent patient: the first Colombian report

El síndrome de Ehlers-Danlos es un conjunto de trastornos hereditarios del tejido conectivo, clínica y genéticamente heterogéneos, caracterizados por hiperextensibilidad cutánea, pobre cicatrización, hipermovilidad articular y friabilidad tisular. Desde 1997, se han reportado variantes poco frecuentes del síndrome, entre las cuales se incluye el de tipo cifoescoliótico, causado por mutaciones en el gen PLOD1, caracterizado por hipotonía muscular grave al nacer, cifoescoliosis grave progresiva, osteopenia, ojos frágiles y fragilidad vascular. También ha sido descrita una rara variante recesiva que compromete el gen FKBP14, con hallazgos clínicos adicionales, que incluyen retardo del desarrollo psicomotor, miopatía, hipoacusia y una proporción normal de lisil-piridinolina a hidroxilisil-piridinolina en la orina. Se presenta el primer caso de una paciente colombiana con una mutación FKBP14 c.362dupC, caracterizada por hipotonía generalizada, retardo en el desarrollo de los hitos motores gruesos, hipoacusia, cifoescoliosis progresiva temprana, hipermovilidad articular y deformidades en los pies.

Ehlers-Danlos syndrome (EDS) is a group of clinically and genetically heterogeneous inherited connective tissue disorders, characterized by skin hyperextensibility, poor wound healing, joint hypermobility and tissue friability. Since 1997 a new spectrum of novel rare EDS-variants has been described, among which is included the EDS kyphoscoliotic type, characterized by severe muscular hypotonia at birth, severe progressive kyphoscoliosis, osteopenia, fragile eyeballs and vascular fragility. This EDS variant is caused by mutations in the PLOD1 gene; however, a rare recessive variant that compromises the FKBP14 gene has been reported, with additional clinical findings that includes gross motor developmental delay, myopathy, hearing impairment and a normal ratio of lysyl pyridinoline to hydroxylysyl pyridinoline in urine. We report the first Colombian patient with a FKBP14 c.362dupC mutation, with clinical features that include generalized hypotonia, delayed gross motor milestones, hearing loss, early-onset progressive kyphoscoliosis, joint hypermobility and foot deformities.

Detección de la mutación I172N en pacientes cubanos con hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21 hidroxilasa / Detection of the I172N Mutation in Cuban Patients with Congenital Adrenal Hyperplasia due to 21 Hydroxylase Insufficiency

Resumen Fundamento: la hiperplasia suprarrenal congénita constituye la causa más frecuente de ambigüedad sexual en la infancia y aproximadamente el 95 % de los casos son producto de mutaciones que ocurren en el gen que codifica la enzima 21α-hidroxilasa. El diagnóstico molecular constituye un elemento a considerar para el manejo y asesoramiento genético a pacientes y familiares en riesgo. Objetivo: identificar la mutación I172N, determinar su frecuencia en la población estudiada y su posible relación con los fenotipos clínicos encontrados. Métodos: se realizó un estudio descriptivo, de corte transversal, durante el período 2014-2016 a pacientes cubanos con diagnóstico de hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21-OH atendidos en el Instituto de Endocrinología de La Habana. El universo de estudio quedó constituido por 32 pacientes. Los resultados se presentaron en tablas o gráficos según fue más factible mostrar la información. Resultados: la mutación I172N fue identificada en individuos de ambos sexos y se estableció su relación con las formas clásicas de la enfermedad. En la población estudiada, se ubicó dentro de las tres mutaciones más frecuentes de las pesquisadas hasta el momento en el Centro Nacional de Genética Médica de la Habana a pacientes con hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21 OH. Conclusiones: el método estandarizado demostró ser reproducible y confiable para el diagnóstico molecular de los individuos con hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21-OH. La mutación I172N se ubica dentro de las tres más frecuentes en la población cubana estudiada y se relaciona con las formas clásicas de la enfermedad.

ABSTRACT Background: congenital adrenal hyperplasia is the most frequent cause of sexual ambiguity in childhood. Molecular diagnosis is an element to be considered for the management and genetic counseling of patients and relatives at risk. Objective: to identify the I172N mutation, to determine its frequency in the studied population and its possible relationship with the clinical phenotypes found. Methods: a descriptive, cross-sectional study was conducted during the 2014-2016 period for Cuban patients diagnosed with congenital adrenal hyperplasia due to 21-OH insufficiency treated at the Institute of Endocrinology of Havana. The universe consisted of 32 patients. The variables analyzed were: age, social sex, age at diagnosis, clinical form of hyperplasia, diagnosis by screening program, family history, consanguinity, nonspecific neonatal death, genital crisis of the newborn, previous molecular diagnosis, mutations studied previously, mutation I172N gene CYP21A. The results were presented in tables or graphs as it was more feasible to show the information. Results: the I172N mutation was identified in individuals of both sexes and its relation with the classic forms of the disease was established. In the studied population the three most frequent mutations of the researched ones, so far in the National Center of Medical Genetics of Havana to patients with congenital adrenal hyperplasia due to 21 OH insufficiency. Conclusions: the standardized method proved to be reproducible and reliable for the molecular diagnosis of individuals with congenital adrenal hyperplasia due to 21-OH insufficiency. The I172N mutation is among the three most frequent in the studied Cuban population and is related to the classic forms of the disease.

Validation of chromogenic in situ hybridization reactions for DNA and RNA detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissue / Validação das reações de hibridização in situ cromogênica para detecção de DNA e RNA em tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina

ABSTRACT Introduction: Chromogenic in situ hybridization (CISH) is used alternatively to the traditional immunohistochemical methods for the diagnosis of infectious diseases in formalin-fixed paraffin-embedded samples, since it presents high sensitivity and specificity. This type of sample undergoes several chemical modifications during histological processing, and both poor and excessive fixation can impair sample quality, making it difficult to obtain good results. In CISH, it is common to use positive samples as quality control for the reactions; however, this practice does not provide any information regarding the preservation of the genetic material, nor does it avoid false-negative results. Objective: The objective of this study was to validate the deoxyribonucleic acid (DNA) (+) and (-), and ribonucleic acid (RNA) (+) and (-) control probes to be used as quality control for the samples, evaluating preservation of the genetic material. Materials and methods: Twelve histological sections were used (in quadruplicate, n = 48), prepared from a pool of tissues without microscopic changes related to infectious and/or inflammatory processes. The CISH protocol was conducted according to the manufacturer's instructions, standardized under the conditions of our laboratory, using commercial DNA and RNA probes chemically linked to digoxigenin. Results and conclusion: Our results were very satisfactory, showing high reproducibility, accuracy, sensitivity and analytical specificity, high predictive values for positive and negative assays and with zero ratio of false-positive and false-negative results, allowing the validation of this reaction.

RESUMEN Introducción: La hibridación in situ cromogénica (CISH) es una alternativa a los métodos tradicionales inmunohistoquímicos para el diagnóstico de enfermedades infecciosas en muestras fijadas en formoly embebidas enparafina, puesto que tiene alta sensibilidad y especificidad. Este tipo de muestra sufre diversas modificaciones químicas durante elprocesamiento histológico, y tanto la mala fijación cuanto la fijación excessiva pueden perjudicar la calidad de las muestras, impidiendo buenos resultados. En la CISH, es común el empleo de muestras positivas para control de calidad de reacciones; sin embargo, esta práctica no proporciona ninguna información acerca de la preservación del material genético. Objetivo: El propósito de este estudio ha sido realizar la validación de las sondas comerciales para ácido desoxirribonucleico (ADN) (+) y (-) y ácido ribonucleico (ARN) (+) y (-), para que sean utilizadas como control de calidad, evaluando la preservación del material genético en las muestras testadas. Material y métodos: Se incluyen en el estudio 12 cortes histológicos (en cuadruplicado, n = 48), confeccionados a partir de un pool de tejidos sin alteraciones microscópicas relacionadas con procesos infecciosos y/o inflamatorios. El protocolo de CISH se desarrolló de acuerdo a las instrucciones del fabricante y bajo las condiciones del nuestro laboratorio, haciendo uso de sondas comerciales de ADN y ARN quimicamente ligadas a digoxigenina. Resultados y conclusión: Nuestros resultados han sido muy satisfactorios, demostrando alta reproducibilidad, exactitud, sensibilidad, y especificidad analítica, así como altos valores predictivos para ensayos positivos y negativos, y con proporción nula de falsos negativos y falsos positivos, lo que ha permitido la validación de esa reacción.

RESUMO Introdução: A hibridização in situ cromogênica (CISH) é uma alternativa aos métodos tradicionais imuno-histoquímicospara diagnóstico de doenças infecciosas em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina, visto que apresenta grande sensibilidade e especificidade. Esse tipo de amostra sofre diversas modificações químicas durante o processamento histológico, e tanto a má fixação quanto a fixação em excesso podem prejudicar a qualidade das amostras, inviabilizando bons resultados. Na CISH, é comum a utilização de amostras positivas como controle de qualidade das reações; entretanto essa prática não fornece nenhuma informação a respeito da preservação do material genético, nem evita resultados falso-negativos nas amostras testadas. Objetivo: O objetivo deste estudo foi realizar a validação das sondas comerciais para ácido desoxirribonucleico (DNA) (+) e (-) e ácido ribonucleico (RNA) (+) e (-), para serem utilizadas como controle de qualidade, avaliando apreservação do material genético nas amostras testadas. Materiais e métodos: Foram utilizados 12 cortes histológicos (em quadruplicata, n = 48), confeccionados a partir de um pool de tecidos sem alterações microscópicas relacionadas com processos infecciosos e/ou inflamatórios. O protocolo de CISH foi conduzido de acordo com as instruções do fabricante e padronizado conforme as condições do nosso laboratório, utilizando sondas comerciais de DNA e RNA quimicamente ligadas à digoxigenina. Resultados e conclusão: Nossos resultados foram muito satisfatórios, demonstrando alta reprodutibilidade, acurácia, sensibilidade e especificidade analítica, bem como altos valores preditivos para ensaios positivos e negativos e com proporção nula de resultados falso-negativos e falso-positivos, o que possibilitou a validação dessa reação.

[2018 Consensus statement by the Spanish Society of Pathology and the Spanish Society of Medical Oncology on the diagnosis and treatment of cancer of unknown primary]. / Consenso 2018 de la Sociedad Española de Anatomía Patológica y la Sociedad Española de Oncología Médica sobre el diagnóstico y tratamiento del cáncer de origen desconocido.

Cancer of unknown primary is defined as a heterogeneous group of tumours that present with metastasis, and in which attempts to identify the original site have failed. They differ from other primary tumours in their biological features and how they spread, which means they can be considered a separate entity. There are several hypotheses regarding their origin, but the most plausible explanation for their aggressiveness and chemoresistance seems to involve chromosomal instability. Depending on the type of study done, cancer of unknown primary can account for 2-9% of all cancer patients, mostly 60-75 years old. This article reviews the main clinical, pathological and molecular studies conducted to analyse and determine the origin of cancer of unknown primary. The main strategies for patient management and treatment, by both clinicians and pathologists, are also addressed.

Diagnóstico molecular de distrofia muscular de Duchenne/Becker en una familia sin antecedentes patológicos de la enfermedad / Molecular Diagnosis of Duchenne/Becker muscular dystrophy in a family with no pathological antecedents of the disease

Fundamento: Las distrofias musculares de Duchenne y de Becker son enfermedades neuromusculares progresivas, con un patrón de herencia recesivo ligado al cromosoma X y causadas por mutaciones en el gen que codifica para la distrofina. El estudio de posibles portadoras en las familias afectadas resulta crucial, ya que genera expectativas y opciones frente al asesoramiento genético.Objetivos: describir el diagnóstico molecular de distrofia muscular de Duchenne/Becker en una familia sin antecedentes patológicos de la enfermedad.Métodos: se realizó un estudio experimental, de las deleciones en el gen distrofia muscular de Duchenne/Becker, en un paciente con diagnóstico clínico de la enfermedad, para lo cual se empleó la técnica de PCR-multiplex siguiendo los métodos descritos por Beggs y Chamberlain. También fueron estudiadas las mujeres de la familia, a través del análisis de marcadores polimórficos mediante repeticiones cortas en tándem de (CA)n.Resultados: fueron identificadas en el paciente deleciones de los exones 47 al 52; así como la procedencia del cromosoma X ligado a la enfermedad (abuelo materno). Se determinó el estado de no portadora en tres mujeres de la familia. No se pudo excluir mosaicismo germinal en la madre del niño.Conclusión: se infirió la ocurrencia de una mutación de novo. El diagnóstico molecular permitió la confirmación diagnóstica de la enfermedad en el niño afectado, además de la posibilidad de brindar un adecuado asesoramiento genético a la familia.

Foundation: Duchenne and  Becker muscular dystrophies are progressive neuromuscular diseases with a pattern of recessive inherited link to chromosome X and caused by mutations in the gene which codifies for dystrophin. The study of possible carriers in affected families is crucial since it generates expectations and options on genetic advisory.Objective: to describe the molecular diagnosis of Duchenne/Becker muscular dystrophy  in a family without pathological antecedents of the disease.Methods: an experimental study was developed about the deletions of Duchenne/Becker gene of muscular dystrophy, in a patient with clinical diagnosis of the disease. It was used multiple PCR technique following the methods described by Beggs and Chamberlain. In addition, the women of the family were studied by the analysis of polymorphic markers through short repetitions in (CA) n tandem.Results: deletions of exons from 47 to 52 were identified in the patient; so as the precedence of the X chromosome related to the disease (maternal grandfather). It was determined the state of non-carrier in three women of the family. It was not possible to exclude germline mosaicism in the child´s mother.Conclusion: the occurrence of a novo mutation was inferred. The molecular diagnosis allowed confirming the diagnosis of the affected child; in addition it was possible to offer adequate genetic advisory to the family.

Desempeño de métodos moleculares para la identificación de subtipos poco comunes del virus de la hepatitis C, genotipo 2 / Performance of molecular methods for identification of unusual subtypes of hepatitis C virus genotype 2

Resumen Introducción. El virus de la hepatitis C (HCV) presenta una gran variabilidad genética, con siete genotipos y numerosos subtipos. La determinación del tipo viral ha sido fundamental para la escogencia y la duración del tratamiento antiviral adecuado. En Venezuela, el genotipo 2 del HCV es relativamente diverso, siendo particularmente prevalente el subtipo 2j. Objetivo. Evaluar el desempeño de las metodologías para la determinación del genotipo del HCV, particularmente para la identificación del subtipo 2j. Materiales y métodos. Se determinaron el genotipo y el subtipo del HCV mediante la técnica de hibridación inversa LiPA (Line Probe Assay) y secuenciación de las regiones genómicas 5'NC y NS5B del virus. Resultados. En 65 muestras analizadas, la metodología basada en la amplificación de la región 5'NC mostró mayor sensibilidad (100 %), en comparación con la técnica LiPA (91 %) y la secuenciación de la región NS5B (77 %). La determinación de genotipo, tomando como método de referencia la secuenciación de NS5B, mostró un alto grado de concordancia para la secuenciación de la región 5´NC y la hibridación inversa LiPA, con 100 % en la asignación de genotipos, comparado con 70 % y 66 % para los subtipos, respectivamente. La secuenciación de la región NS5B permitió identificar los subtipos 2j y 2s, los cuales no fueron detectados por las otras metodologías. No se observó un patrón característico para las muestras subtipo 2j en la hibridación inversa LiPA. Conclusión. Aunque es la metodología con menor sensibilidad, la secuenciación de la región NS5B es una herramienta poderosa para la correcta discriminación de los distintos subtipos circulantes del HCV, lo cual reviste importancia epidemiológica.

Abstract Introduction: Hepatitis C virus (HCV) displays high genetic variability, with seven genotypes and numerous subtypes. The determination of the viral type has been essential for the selection and timing of antiviral treatment. In Venezuela, HCV genotype 2 is relatively diverse, being particularly prevalent subtype 2j. Objective: To evaluate the performance of methodologies for genotyping HCV, particularly for identification of subtype 2j. Materials and methods: HCV genotype and subtype were determined by reverse hybridization technique (LiPA) and sequencing of the HCV 5'UTR and NS5B regions. Results: A total of 65 samples from HCV-infected patients were analyzed. PCR amplifications of the 5'UTR region exhibited the highest sensitivity (100% vs 91% for LiPA and 77% for NS5B). Genotype determination, taking as reference test NS5B, showed 100% concordance with the other methods, and 67% and 59% for subtypes with 5´NC and LiPA, respectively. NS5B sequencing allowed the identification of subtypes 2j and 2s, which were not detected by the other methods. A specific LiPA pattern was not observed for HCV subtype 2j. Conclusion: Although being the methodology with lowest sensitivity for amplification of HCV RNA, sequencing NS5B region remains a powerful tool for correct discrimination of the different HCV subtypes, which is of epidemiological relevance.

Aplicação de diagnóstico molecular de distúrbios da hemoglobina no sistema de saúde pública no sul do Brasil / Application of molecular diagnosis of hemoglobin disorders in the public health system

O objetivo deste trabalho é caracterizar por biologia molecular as variantes genéticas raras nas hemoglobinas alfa e beta de bebês incluídos no programa de triagem neonatal do Estado do Rio Grande do Sul, entre novembro de 2013 e março de 2018. (AU)

Autism spectrum disorders: an updated guide for genetic counseling / Transtornos do espectro autista: um guia atualizado para aconselhamento genético

ABSTRACT Autism spectrum disorder is a complex and genetically heterogeneous disorder, which has hampered the identification of the etiological factors in each patient and, consequently, the genetic counseling for families at risk. However, in the last decades, the remarkable advances in the knowledge of genetic aspects of autism based on genetic and molecular research, as well as the development of new molecular diagnostic tools, have substantially changed this scenario. Nowadays, it is estimated that using the currently available molecular tests, a potential underlying genetic cause can be identified in nearly 25% of cases. Combined with clinical assessment, prenatal history evaluation and investigation of other physiological aspects, an etiological explanation for the disease can be found for approximately 30 to 40% of patients. Therefore, in view of the current knowledge about the genetic architecture of autism spectrum disorder, which has contributed for a more precise genetic counseling, and of the potential benefits that an etiological investigation can bring to patients and families, molecular genetic investigation has become increasingly important. Here, we discuss the current view of the genetic architecture of autism spectrum disorder, and list the main associated genetic alterations, the available molecular tests and the key aspects for the genetic counseling of these families.

RESUMO O transtorno do espectro autista é um distúrbio complexo e geneticamente heterogêneo, o que sempre dificultou a identificação de sua etiologia em cada paciente em particular e, por consequência, o aconselhamento genético das famílias. Porém, nas últimas décadas, o acúmulo crescente de conhecimento oriundo das pesquisas sobre os aspectos genéticos e moleculares desta doença, assim como o desenvolvimento de novas ferramentas de diagnóstico molecular, tem mudado este cenário de forma substancial. Atualmente, estima-se que, por meio de testes moleculares, é possível detectar uma alteração genética potencialmente causal em cerca de 25% dos casos. Considerando-se também a avaliação clínica, a história pré-natal e a investigação de outros aspectos fisiológicos, pode-se atribuir uma etiologia para aproximadamente 30 a 40% dos pacientes. Assim, em vista do conhecimento atual sobre a arquitetura genética do transtorno do espectro autista, que tem tornado o aconselhamento genético cada vez mais preciso, e dos potenciais benefícios que a investigação etiológica pode trazer aos pacientes e familiares, tornam-se cada vez mais importantes os testes genéticos moleculares. Apresentamos aqui uma breve discussão sobre a visão atual da arquitetura genética dos transtornos do espectro autista, listando as principais alterações genéticas associadas, os testes moleculares disponíveis e os principais aspectos a se considerar para o aconselhamento genético destas famílias.

Molecular detection of clarithromycin and fluoroquinolones resistance in helicobacter pylori infection, directly applied to gastric biopsies, in an urban brazilian population

ABSTRACT Background - Antimicrobial resistance is the major factor leading to eradication failure in H. pylori treatment. Molecular tests are useful to detect genetic mutations predictive of clarithromycin and fluoroquinolones resistance. Knowledge of the local prevalence rate of resistance is important to define the best recommended treatment. Objective - To assess the prevalence of primary resistance of H. pylori to clarithromycin and fluoroquinolones, using a molecular test, in a Southeastern urban Brazilian population. Methods - A total of 72 H. pylori seropositive patients [65% female, mean age 39 (19-73) years] never treated before for this infection were studied. All patients underwent gastroscopy in addition to antrum and corpus biopsies and molecular test GenoType HelicoDR (Hain Life Science, Germany) to detect H. pylori and point mutations in genes responsible for clarithromycin and fluoroquinolone resistance. The molecular procedure was divided into three steps: DNA extraction from biopsy samples, a multiplex amplification with biotinylated primers and a reverse hybridization. The most frequent point mutations involved in resistance to the two antibiotics were evaluated. Results - Resistance to clarithromycin was detected in nine (12.5%) patients and to fluoroquinolones in eight (11.1%) patients. The point mutation A2147G was the most common (77.8%) among resistant strains to clarithromycin. In 50% of the resistant strains to fluoroquinolones, the mutant codon couldn't be identified. Conclusion - The resistance rates to clarithromycin and fluorquinolones in a large urban population in the Southeast of Brazil were acceptable, suggesting that these drugs remain appropriate options to first and second-line of H. pylori treatment. The molecular test represents an adequate diagnostic tool for monitoring H. pylori resistance.

RESUMO Contexto - A resistência aos antimicrobianos é o principal fator associado à falha terapêutica no tratamento do H. pylori. Testes moleculares são úteis na detecção das mutações genéticas associadas ao desenvolvimento de resistência à claritromicina e fluorquinolonas. O conhecimento da taxa de prevalência local de resistência é importante na definição do melhor esquema terapêutico. Objetivo - Estimar a prevalência de resistência primária do H. pylori à claritromicina e fluorquinolonas, empregando-se um teste molecular, em uma capital do Sudeste do Brasil. Métodos - Setenta e dois pacientes com sorologia positiva para H. pylori [65% mulheres, idade média 39 (19-73) anos], nunca tratados previamente para essa infecção, foram selecionados. Todos os pacientes submeteram-se à endoscopia digestiva com biópsias de antro e corpo e realização do teste molecular GenoType HelicoDR (Hain Life Science, Alemanha) para a detecção do H. pylori e das mutações pontuais dos genes responsáveis pela resistência à claritromicina e fluorquinolonas. O procedimento molecular constituía-se de três etapas: extração do DNA a partir das amostras endoscópicas, amplificação multiplex com primers biotinilados e hibridização reversa. As mutações pontuais mais frequentemente envolvidas com resistência aos dois antibióticos foram avaliadas. Resultados - Resistência à claritromicina foi detectada em nove (12,5%) pacientes e às fluorquinolonas em oito (11,1%) pacientes. A mutação pontual A2147G foi a mais comum (77,8%) entre as cepas resistentes à claritromicina. Em 50% das cepas resistentes à fluorquinolonas, o códon mutante não pôde ser identificado. Conclusão - As taxas de resistência à claritromicina (12,5%) e às fluorquinolonas (11,1%), em uma importante capital do Sudeste do Brasil, mostraram índices aceitáveis, sugerindo que essas drogas permanecem opções apropriadas para o tratamento de primeira e segunda linha do H. pylori. O teste molecular constitui uma ferramenta diagnóstica adequada para monitorar a resistência do H. pylori.

Muir-Torre Syndrome: case report and molecular characterization / Sindrome de Muir-Torre: relato de caso e caracterizacao molecular

CONTEXT: Muir-Torre syndrome is a rare autosomal dominant genodermatosis caused by mutations in the mismatch repair genes. It is characterized by the presence of sebaceous skin tumors and internal malignancies, affecting mainly the colon, rectum and urogenital tract. Awareness of this syndrome among physicians can lead to early diagnosis of these malignancies and a better prognosis. CASE REPORT: We report the case of a Chilean patient who, over the course of several years, had multiple skin lesions, endometrial cancer and colon cancer. The syndrome was diagnosed using molecular techniques such as microsatellite instability analysis, immunohistochemistry and DNA sequencing, which allowed us to find the causative mutation. CONCLUSION: Molecular diagnostics is a highly useful tool, since it allows clinicians to confirm the presence of mutations causing Muir-Torre syndrome. It is complementary to the analysis of the clinical data, such as dermatological presentation, presence of visceral malignancies and family history of colorectal tumors, and it provides important knowledge to help physicians and patients choose between treatment options. .

CONTEXTO: A síndrome de Muir-Torre é uma genodermatose autossômica dominante rara causada por mutações nos genes de reparo de incorreções. Caracteriza-se pela presença de tumores sebáceos da pele e doenças malignas internas, afetando principalmente cólon, reto e trato urogenital. A consciência desta síndrome pelos médicos pode levar ao diagnóstico precoce dessas doenças malignas e a um melhor prognóstico. RELATO DE CASO: Relatamos o caso de uma paciente chilena que, ao longo de vários anos, teve lesões cutâneas múltiplas, câncer de endométrio e câncer de cólon. A síndrome foi diagnosticada com técnicas moleculares, como a análise de instabilidade de microssatélites, imunoistoquímica e sequenciamento de DNA, o que nos permitiu encontrar a mutação causadora. CONCLUSÃO: Diagnóstico molecular é uma ferramenta muito útil, uma vez que permite que os clínicos confirmem a presença de mutações causadoras de síndrome de Muir-Torre. É complementar para a análise dos dados clínicos, tais como a apresentação dermatológica, a presença de doenças malignas viscerais e história familiar de tumores colorrectais, e fornece conhecimentos importantes para ajudar os médicos e os pacientes a escolher entre opções de tratamento. .